あなたのウェスタンブロットをスーパープレックスに
化学発光、2色蛍光、総タンパク質、タンパク質ノーマライゼーションを同時にアッセイ。
スーパープレックスとは何でしょうか？
Jessの「スーパープレックス：Superplex」は、ウェスタンブロットや他のタンパク質分析システムでこれまで行われてきた多重化をはるかに超えるもので、私たちはそれを何か別の名称で呼ぶ必要がありました。
ウェスタンブロットは、総タンパク質の検出と解析、タンパク質の標準化の一般的なラボ手法です。これは、極めて高い精度で実証された方法論に基づいており、世界中の研究室や研究機関で使用されている基本的な技術です。ProteinSimpleは、このウェスタンブロットを次のレベルへ進化させるために、複数のターゲットとパラメータを同時に分析する装置を開発しました。
スーパープレックスを使用すると、これまでずっとやりたかったことをすべて行えます。
- 同一サンプルで同時に化学発光と蛍光アッセイの多重測定ができる。
- 複数ターゲットとパラメータを同時に確認できる。
- タンパク質の存在量、アイソフォーム、分子量に関する情報を一度に取得できる。
- 検出チャネルを犠牲にすることなく総タンパク質を測定できる。
- 分子量が同じであっても、同じサンプルで高濃度タンパク質と微量タンパク質を検出できる。
- 発光／蛍光多重化アッセイを並行して行うことで、タンパク質を見逃すことなく確実に検出することができる。
- ノーマライズされた、定量的なサイズ（分子量）ベースのデータを、多重化アッセイを行うことで3.5時間で取得し、時間を節約できる。
- 貴重なサンプルを節約できる — Jessは3 µLの微量サンプルで検出。
Jessだけの機能
Superplex Western Assayの機能
最大3チャネルのマルチプレックスでタンパク質ターゲットを検出
Jessでスーパープレックスを行うと、特定のサンプルや実験計画のニーズに合わせて、化学発光と2色の蛍光（NIRとIR）チャネルを組み合わせて利用することができます。また、総タンパク質を検出するために、いずれかの検出チャネルをあきらめて、総タンパク質を検出する必要はありません。総タンパク質を検出しつつも、化学発光と2色の蛍光（NIRとIR）チャネルをフルで活用し、多重解析することができます。
Superplex Simple Western Assayの原理。 サンプル、分離マトリックス、スタッキングマトリックス、抗体、試薬は自動的にロードされ、スーパープレックス免疫測定の全ステップが1本のキャピラリーで行われます。Jessはまずサンプルに含まれるタンパク質の総量を検出し、次に蛍光の検出、化学発光の順で目的のターゲットに対するプローブを行います。
Simple Westernサイズアッセイは、最新のウエスタン技術を使用して複数のタンパク質ターゲットを柔軟に検出することができます。リン酸化タンパク質などのターゲットには、超高感度化学発光アッセイを使用してください。同じ分子量(MW)を持つ2つのタンパク質を測定するために従来のマルチプレックスを行いたい場合は、NIRとIR蛍光を使用して両方を検出することができます。同じMWで3つ目のターゲットがある場合は、3-プレックスを行います。1つを発光で検出し、他の2つは蛍光で検出します。また必要に応じていつでも分子量の異なる複数のターゲットを測定することができます。データを発表する予定がある？実験結果にもう少し自信を持ちたい？ HKP(ハウスキーピングタンパク質)に煩わされることなく、Jessにタンパク質ノーマライゼーションアッセイを同時に実行してもらえばよいのです。そして、取り掛かっている論文を素早く仕上げる必要があるとき、JessのSuperplexingは3.5時間以内に25サンプルでタンパク質のノーマライゼーションを行い、少なくとも27データポイント/時の処理を行います。
マルチプレックス・ウェスタンブロッティングの長所と短所
より良い結果を得るために、より欠点を少なくするために、スーパープレックスを活用
これまでウェスタンブロットのマルチプレックスは一般的な方法でしたが、それに伴う様々な問題がありました。スーパープレックスは、マルチプレックスの長所を生かしつつ、短所を取り除くことができます。
JessのSuperplexワークフローとデータ
より短時間でより多くのウェスタンブロットデータを取得
Jessでスーパープレックスすると、3µLの微量サンプルで少なくとも4つのデータポイントが得られます。一度に4つのことを行うことで、時間を節約できることは言うまでもありませんが、それらを行うのに3時間半しかかかりません。しかし、スーパープレックスの利点はそれだけではありません。それぞれのデータポイントが同じキャピラリーで取得されるため、測定間、サンプル間、レーン間それぞれのデータの比較、評価、解釈に時間を費やす必要がありません。つまり、ウェスタンブロット分析結果について、より多くの情報を入手し、自信を持って結論を出すことができるのです。
JessでのSuperplex実験のセットアップは簡単です。サンプル、抗体、試薬をプレートにロードします。そして、Jessにプレートとキャピラリーカートリッジをセットします。そこからはJessがすべてやってくれます。Compass for Simple Westernソフトウェアが自動でデータを解析し、結果を表示します。しかも、ターゲットデータを自動で正規化し解析するので、鉛筆と関数電卓は必要はありません。
Calyculin Aで処理したJurkat細胞では、Aktリン酸化（S473）が増加している。 Compass for Simple Westernソフトウェアで、NIR（赤）チャネルと化学発光（黒）チャネルをそれぞれ用いたAktとp-Aktの検出結果のレーンビュー（A）。0.6 mg/mLのJurkatホール細胞ライセート（青と緑の波形）と 、Jurkat + Calyculin A ライセート（オレンジと薄紫の波形）を用いたp-Akt（発光）とAkt（NIR）タンパク質のシグナルをCompassソフトウエアのe-gram表示でオーバーレイしたグラフビュー (B)。各キャピラリーの定量的な標的タンパク質の発現データを示すCompass for Simple Westernソフトウェアのピーク表(C)。
各キャピラリーで標的タンパク質をタンパク質の総量で正規化、または発現量をプロットするために、それらの数値を計算する必要がありますか？問題ありません。Compassは、計算用のフォーマットでデータをエクスポートすることができます。
タンパク質の正規化により、Jurkat + Calyculin A溶解液の濃度を上げても、p-Aktシグナルが同等であることが確認された。 Jessの化学発光チャネルで検出されたp-Aktタンパク質発現（A）と、NIRチャネルで検出された総Akt（B）を、Rawピーク面積（オレンジバー）および正規化したピーク面積（ブルーバー）で示し比較したデータです。予想通り、Rawデータを正規化すると、3つのライセート濃度すべてにおいて類似したピーク面積となった。プロットされた値は、N3で実行されたサンプルの平均タンパク質ピーク面積です。
マルチプレックスを止めて、スーパープレックスを始めましょう
